OC-2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-432551

Panoramica

Onecut2 (OC-2) è un fattore di trascrizione homeobox del topo che coordina la specificazione del destino cellulare e la patternizzazione dei tessuti durante lo sviluppo, con ruoli di primo piano nella neurogenesi e nella differenziazione degli organi. Legandosi a elementi regolatori del DNA, OC-2 modula programmi trascrizionali che si intersecano con reti determinanti di linea coinvolte nel controllo di proliferazione, differenziamento e identità regionale. L’attività della famiglia Onecut contribuisce al mantenimento dell’identità cellulare e alla maturazione in molteplici contesti epiteliali e neuronali. Un’espressione deregolata di ONECUT2 è stata associata a stati di differenziamento alterati e a circuiti trascrizionali oncogenici in diversi tipi di tumore, a supporto della sua utilità come nodo meccanicistico negli studi di biologia dello sviluppo e del cancro.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO OC-2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Onecut2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Onecut2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Onecut2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina OC-2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Onecut2 per lo studio della segnalazione di OC-2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Onecut2 critici per la funzione di OC-2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Onecut2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal OC-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal OC-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Onecut2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal OC-2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR OC-2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Onecut2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Onecut2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.