OBCAM Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405750

Panoramica

OPCML codifica OBCAM, una molecola di adesione cellulare della superfamiglia delle immunoglobuline ancorata al glicosilfosfatidilinositolo (GPI), arricchita sulla superficie cellulare, dove sostiene il riconoscimento cellula–cellula e l’architettura tissutale. OBCAM partecipa alla segnalazione dipendente dal contatto organizzando microdomini di membrana e modulando vie associate alle tirosin-chinasi recettoriali e alle integrine, che influenzano la dinamica del citoscheletro, la migrazione e i programmi di sopravvivenza. Nella biologia umana, alterazioni dell’espressione e della regolazione epigenetica di OPCML/OBCAM sono state collegate a un’adesione compromessa e a una segnalazione di crescita aberrante in molteplici contesti tumorali, nonché a cambiamenti nella connettività neuronale. Queste proprietà rendono OPCML un nodo utile per studiare la trasduzione del segnale dipendente dall’adesione, la compartimentalizzazione di membrana e i fenotipi guidati dal microambiente.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO OBCAM (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene OPCML in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del OPCML insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto OPCML a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina OBCAM.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di OPCML per lo studio della segnalazione di OBCAM, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni OPCML critici per la funzione di OBCAM
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di OPCML per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal OBCAM CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal OBCAM CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus OPCML. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal OBCAM Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR OBCAM (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia OPCML per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio OPCML definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.