OBCAM CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405750

Übersicht

OPCML kodiert OBCAM, ein glycosylphosphatidylinositol-(GPI)-verankertes Zelladhäsionsmolekül der Immunglobulin-Superfamilie, das an der Zelloberfläche angereichert ist und dort die Zell‑Zell-Erkennung sowie die Gewebearchitektur unterstützt. OBCAM ist an kontaktabhängiger Signalübertragung beteiligt, indem es Membran-Mikrodomänen organisiert und Rezeptor-Tyrosinkinasen- sowie integrinassoziierte Signalwege moduliert, die die Zytoskelettdynamik, Migration und Überlebensprogramme beeinflussen. In der Humanbiologie werden veränderte OPCML/OBCAM-Expression und epigenetische Regulation mit gestörter Adhäsion und aberranter Wachstumssignalisierung in mehreren Tumorkontexten sowie mit Veränderungen der neuronalen Konnektivität in Verbindung gebracht. Diese Eigenschaften machen OPCML zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung adhäsionsabhängiger Signaltransduktion, Membrankompartimentierung und mikroenvironmentgetriebener Phänotypen.

Das OBCAM CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des OPCML-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des OPCML-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von OPCML nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die OBCAM-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von OPCML-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der OBCAM-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf OPCML-Exone abzielen, die für die OBCAM-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere OPCML-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom OBCAM CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom OBCAM CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des OPCML-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das OBCAM HDR-Plasmid (h) und OBCAM HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von OPCML-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten OPCML-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.