OB-cadherin Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401051-ACT

CDH11 codifica l’OB-caderina, una caderina classica che media l’adesione omofilica cellula-cellula dipendente da Ca²⁺ e sostiene la morfogenesi tissutale, la coesione mesenchimale e l’organizzazione dello stroma. L’interazione dell’OB-caderina si collega alle catenine e al citoscheletro di actina, influenzando la stabilità delle giunzioni, la meccanotrasduzione e la segnalazione dipendente dal contatto, che si intreccia con vie come Wnt/β-catenina e con la dinamica del citoscheletro regolata dalle GTPasi Rho. Nella biologia umana, CDH11 è fortemente associato ai programmi di linea dei fibroblasti e degli osteoblasti e contribuisce al rimodellamento della matrice extracellulare e a fenotipi migratori. Un’espressione deregolata di CDH11 è stata riportata in contesti quali la fibrosi, l’attivazione stromale correlata all’artrite e le interazioni tumore-stroma, rendendolo rilevante per studi sulla segnalazione dipendente dall’adesione e sulla regolazione del microambiente.

OB-cadherin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CDH11 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

OB-cadherin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CDH11 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CDH11, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di OB-cadherin. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CDH11 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da OB-cadherin nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via OB-cadherin nelle cellule tumorali con espressione di CDH11 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.