Nrf2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400017-ACT

NFE2L2は、細胞のレドックス恒常性および求電子性物質の解毒を中心的に制御するヒト転写因子Nrf2をコードしています。酸化ストレスまたは外来性化学物質（キセノバイオティクス）によるストレス下では、Nrf2が細胞内に蓄積し、抗酸化応答配列（ARE）に結合して、グルタチオン合成、NADPH再生、ヘム代謝、プロテオスタシスに関与する遺伝子の発現を誘導します。これにより、KEAP1–CUL3ユビキチン軸およびMAPK/PI3K関連経路を介したシグナル伝達が統合されます。このプログラムは炎症の基調や代謝適応を形作り、Nrf2活性の異常は、神経変性、心代謝機能障害、腫瘍生物学など、慢性的な酸化ストレスを特徴とする病態に関与すると考えられています。

Nrf2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NFE2L2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Nrf2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NFE2L2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNFE2L2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Nrf2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNFE2L2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNrf2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNFE2L2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNrf2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。