NPAS4 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-432569-ACT

マウスNpas4は、神経細胞PASドメインタンパク質4（NPAS4）をコードします。NPAS4は活動依存性の塩基性ヘリックス・ループ・ヘリックス（bHLH）PAS型転写因子であり、カルシウム流入を、抑制性シナプスの発達および興奮性—抑制性バランスを制御する遺伝子プログラムへと結び付けます。NPAS4は、シナプス可塑性、回路の洗練、刺激応答性リモデリングに関わる転写ネットワークを制御し、神経細胞の脱分極や下流のCREB関連経路からのシグナルを統合します。研究環境においてNPAS4発現の変化は、ストレス関連の行動適応、けいれん感受性、認知機能障害などを含む神経精神・神経発達上の表現型と関連付けられており、ネットワーク安定性の機構との関連性が示されています。迅速な初期応答制御因子として、NPAS4は神経活動が転写状態やシナプス結合性をどのように再構築するかを検討するために広く用いられています。

NPAS4 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Npas4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

NPAS4 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Npas4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNpas4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性NPAS4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNpas4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNPAS4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNpas4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNPAS4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。