NOSIP Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404767-ACT

NOSIP (nitric oxide synthase interacting protein) umano è un adattatore regolatorio che si lega alle ossido nitrico sintasi, incluse eNOS e nNOS, e modula la produzione di ossido nitrico e la segnalazione a valle dipendente dal cGMP. Influenzando il trafficking delle NOS, la formazione di complessi e l’attività enzimatica, NOSIP può modellare processi cellulari quali la regolazione del tono vascolare, la segnalazione neuronale e le risposte immunitarie mediate dall’ossido nitrico. Interazioni NOS–NOSIP deregolate sono state associate ad alterazioni dell’equilibrio redox e della segnalazione infiammatoria, rendendo NOSIP un bersaglio utile per investigare vie implicate in fenotipi cardiovascolari e neuroinfiammatori. Lo studio dell’espressione e della funzione di NOSIP aiuta a chiarire come la biodisponibilità dell’ossido nitrico si integri con reti di segnalazione legate alla risposta allo stress e alle citochine nelle cellule umane.

NOSIP Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di NOSIP senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

NOSIP Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus NOSIP nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione NOSIP, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di NOSIP. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus NOSIP nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da NOSIP nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via NOSIP nelle cellule tumorali con espressione di NOSIP silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.