Nopp140 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402907-ACT

NOLC1は、リボ核タンパク質の組み立てと核内輸送の足場として機能する核小体／カハール小体のリン酸化タンパク質Nopp140をコードします。Nopp140は、snoRNPの動態、pre-rRNAのプロセシング、核小体の構造維持を協調させることでリボソーム生合成に関与し、さらにカハール小体との相互作用を介してスプライソソームsnRNPの成熟も支えます。その活性は広範なリン酸化によって制御され、RNAポリメラーゼI依存的な転写プログラム、核小体ストレス応答、細胞周期と連動した成長制御と結びついています。NOLC1/Nopp140が関与する核小体恒常性およびRNAプロセシング経路の破綻は、ヒト細胞における増殖シグナル、ゲノム安定性、ストレス適応的な遺伝子発現リモデリングの研究において重要です。

Nopp140 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NOLC1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Nopp140 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NOLC1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNOLC1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Nopp140の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNOLC1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNopp140依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNOLC1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNopp140経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。