Nop25 Plasmide Double Nickase (h): sc-408434-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Nop25 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Nop25 Double Nickase Plasmid (h) e il Nop25 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira NOL12. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Nop25 Antibody (E-2): sc-374257
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Nop25 Plasmide Double Nickase (h) | sc-408434-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Nop25 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-408434-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano **NOL12** codifica la proteina nucleolare **Nop25**, un fattore conservato implicato nel metabolismo dell’RNA e nell’omeostasi del nucleolo. Nop25 è stata associata al processamento e alla maturazione dell’RNA ribosomiale, collegandola alla biogenesi dei ribosomi e al coordinamento delle risposte allo stress nucleolare. Attraverso questi processi, NOL12 può influenzare la capacità traslazionale globale e i programmi di crescita accoppiati al ciclo cellulare che dipendono da una produzione efficiente di rRNA. Alterazioni della funzione nucleolare e la deregolazione delle vie di processamento dell’RNA che coinvolgono NOL12 sono spesso studiate, nei sistemi modello, nel contesto di disturbi proliferativi e di fenotipi legati al mantenimento del genoma.
Nop25 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus NOL12 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di NOL12. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di NOL12. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con NOL12 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.