Nlk Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401672-ACT

Il gene umano **NLK** codifica la **nemo-like chinasi (Nlk)**, una chinasi atipica della famiglia MAPK a serina/treonina che agisce come regolatore, dipendente dal contesto, di programmi trascrizionali. Nlk integra segnali provenienti dalla via **Wnt/β-catenina** e dalle vie **Wnt non canoniche** e modula fattori di trascrizione e co-regolatori a valle, influenzando le decisioni sul destino cellulare, la differenziazione e l’espressione di geni responsivi allo stress. Modellando questi output di segnalazione, **NLK** è stata implicata in meccanismi rilevanti per l’equilibrio della segnalazione oncogenica, la regolazione dell’infiammazione e processi di neurosviluppo in cui il controllo trascrizionale è un determinante chiave del fenotipo.

Nlk Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di NLK senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Nlk Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus NLK nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione NLK, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Nlk. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus NLK nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Nlk nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Nlk nelle cellule tumorali con espressione di NLK silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.