Nkx-2.3 Double Nickase Plasmid (h): sc-406709-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Nkx-2.3 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Nkx-2.3 Double-Nickase-Plasmid (h) und Nkx-2.3 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf NKX2-3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Nkx-2.3: sc-517182
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Nkx-2.3 Double Nickase Plasmid (h) | sc-406709-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Nkx-2.3 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-406709-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NKX2-3 kodiert den Homeobox-Transkriptionsfaktor Nkx-2.3, einen nukleären, DNA-bindenden Regulator, der aus dem Endoderm hervorgehende Gewebe strukturiert und dazu beiträgt, die Identität des Darms sowie lymphoider Organe aufrechtzuerhalten. Durch die Steuerung linienspezifischer transkriptioneller Programme beeinflusst Nkx-2.3 die epitheliale Differenzierung, die Organisation der mukosalen Immunabwehr und die regionale Gefäßentwicklung und ist dabei in übergeordnete entwicklungsbiologische Signalnetzwerke eingebunden, die die Homöostase des Darms prägen. Eine veränderte NKX2-3-Aktivität wurde mit fehlregulierter Genexpression bei intestinalen Entzündungen und immunassoziierten Phänotypen in Verbindung gebracht und ist damit ein relevanter Ansatzpunkt, um Mechanismen zu untersuchen, die Entwicklungsregulatoren mit der mukosalen Immunität verknüpfen. Seine Transkriptionsziele und seine kontextabhängige Aktivität sprechen für die Untersuchung genregulatorischer Schaltkreise im Darmepithel sowie in stromalen und immunologischen Kompartimenten.
Nkx-2.3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des NKX2-3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von NKX2-3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die NKX2-3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit NKX2-3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.