Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 3/CHRNA3 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401582-NIC

CHRNA3は、ニコチン性アセチルコリン受容体のα3サブユニットをコードしており、速いコリン作動性神経伝達を担うリガンド作動性陽イオンチャネルの中核構成要素です。アセチルコリンまたはニコチンが結合すると、CHRNA3を含む受容体は膜脱分極とCa²⁺流入を調節し、細胞内シグナル伝達と連動して興奮性、シナプス伝達、神経内分泌分泌に影響を与えます。ヒト組織ではCHRNA3は自律神経節で高く発現し、心血管・消化管・呼吸機能を制御する経路に寄与します。CHRNA3座位における遺伝的変異や発現調節の破綻は、ニコチン依存や喫煙関連疾患の感受性と関連付けられており、コリン作動性シグナル伝達および依存症の生物学的機序を解明する研究における有用性を支持しています。

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 3/CHRNA3 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CHRNA3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CHRNA3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CHRNA3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CHRNA3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。