NGFR p75 Plasmide Double Nickase (h): sc-400552-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- NGFR p75 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il NGFR p75 Double Nickase Plasmid (h) e il NGFR p75 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira NGFR. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: NGFR p75 Antibody (B-1): sc-271708
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
NGFR p75 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400552-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
NGFR p75 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400552-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NGFR codifica il recettore p75 delle neurotrofine (NGFR p75), un membro della superfamiglia dei recettori del TNF che lega neurotrofine e proneurotrofine per modulare la sopravvivenza neuronale, l’apoptosi, la crescita dei neuriti e il rimodellamento sinaptico. NGFR p75 funziona come un nodo di segnalazione dipendente dal contesto grazie alle interazioni con corecettori quali i recettori Trk e la sortilina, attivando vie che includono NF-κB, JNK/c-Jun, la dinamica del citoscheletro mediata da RhoA e la segnalazione della ceramide. Al di fuori del sistema nervoso, NGFR p75 influenza la biologia delle cellule di Schwann, la rigenerazione assonale e gli stati cellulari derivati dalla cresta neurale. Una segnalazione e un’espressione deregolate di NGFR sono state associate a processi neurodegenerativi, alle risposte al danno nervoso e alla plasticità e invasività delle cellule tumorali in diversi contesti rilevanti per il cancro, supportandone l’impiego in studi meccanicistici.
NGFR p75 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus NGFR nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di NGFR. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di NGFR. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con NGFR interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.