NELF-B Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405667

Panoramica

NELFB codifica NELF-B, una subunità centrale del complesso del fattore di elongazione negativo (NELF), che coopera con DSIF per regolare la pausa prossimale al promotore della RNA polimerasi II e coordinare l’elongazione trascrizionale produttiva. Attraverso questo checkpoint, NELF-B influenza programmi di espressione genica rapidi e responsivi agli stimoli, la maturazione dell’RNA co-trascrizionale e il controllo delle cinetiche della trascrizione legato alla cromatina. La pausa dipendente da NELF-B è integrata con vie di segnalazione e di risposta allo stress che modulano finemente l’output trascrizionale e le transizioni dello stato cellulare. La disregolazione del controllo dell’elongazione e delle reti associate alla pausa è stata implicata in programmi trascrizionali oncogenici e in altre malattie caratterizzate da una regolazione genica alterata, rendendo NELFB un nodo utile per studi meccanicistici del controllo della trascrizione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO NELF-B (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene NELFB in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del NELFB insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto NELFB a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina NELF-B.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di NELFB per lo studio della segnalazione di NELF-B, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni NELFB critici per la funzione di NELF-B
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di NELFB per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal NELF-B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal NELF-B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus NELFB. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal NELF-B Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR NELF-B (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia NELFB per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio NELFB definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.