Nebulette Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-406565-ACT

NEBL codifica a nebulette, uma proteína de ligação à actina específica do músculo estriado que se localiza no disco Z e ajuda a organizar a arquitetura dos filamentos finos em cardiomiócitos. Por meio de interações com a actina e componentes de ancoragem do disco Z, a nebulette contribui para a montagem do sarcômero, a mecanotransdução e a estabilização da função contrátil. Alterações na expressão de NEBL ou na integridade da proteína estão associadas à desorganização miofibrilar e a mudanças na fisiologia do músculo cardíaco, o que torna esse gene relevante para estudos de remodelamento do citoesqueleto e de vias ligadas a cardiomiopatias. Como gene humano, o NEBL é frequentemente investigado em modelos de desenvolvimento cardíaco, respostas ao estresse e redes de sinalização sarcomérica.

Nebulette O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NEBL sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Nebulette O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NEBL em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NEBL, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Nebulette. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NEBL nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Nebulette no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Nebulette em células tumorais com expressão de NEBL silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.