NDH II Plasmide Double Nickase (h): sc-402757-NIC

DHX9 codifica NDH II, un’elicasi multifunzionale ATP-dipendente della famiglia DExH-box che si lega a DNA e RNA per rimodellare le strutture degli acidi nucleici durante la trascrizione, il processamento dell’RNA e la manutenzione del genoma. NDH II partecipa alla sorveglianza e alla risoluzione degli R-loop, supporta la progressione della forcella di replicazione e interagisce con le vie della risposta al danno al DNA, inclusi meccanismi accoppiati alla ricombinazione omologa e alla segnalazione dei checkpoint. Attraverso i suoi ruoli nel coordinare la trascrizione con il metabolismo dell’RNA e nel preservare la stabilità genomica, DHX9 è frequentemente analizzato in studi sulle risposte allo stress e sull’omeostasi alterata degli ibridi RNA–DNA. Alterazioni dell’attività di DHX9 sono state collegate a programmi di splicing aberranti e a fenotipi di instabilità cromosomica rilevanti per la ricerca meccanicistica in biologia del cancro e nello stress genomico associato alla neurodegenerazione.

NDH II Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DHX9 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DHX9. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DHX9. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DHX9 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.