NCX2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403352-ACT

SLC8A2は、ヒトのNa⁺/Ca²⁺交換輸送体NCX2をコードしており、細胞膜に存在するアンチポーターとしてNa⁺勾配を利用してCa²⁺の細胞外排出を担います。特定の電気化学的条件下では、逆にCa²⁺の細胞内流入を媒介することもあります。細胞質内Ca²⁺動態を形作ることで、NCX2は活動依存的なシグナル伝達、膜興奮性、Ca²⁺依存性酵素の活性化に影響し、シナプス伝達や神経細胞の恒常性を制御する経路と統合されます。ナトリウム–カルシウム交換の変調はCa²⁺ハンドリングやイオン性ストレスに対する細胞の抵抗性を乱し得るため、SLC8A2は神経機能障害や神経変性に関連するメカニズムの研究において重要な標的となります。また、神経細胞で豊富に発現するという特徴は、ヒトモデル系における脳領域および細胞種特異的なCa²⁺制御の検討を後押しします。

NCX2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SLC8A2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

NCX2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SLC8A2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSLC8A2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性NCX2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSLC8A2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNCX2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSLC8A2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNCX2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。