NARC-1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402445-ACT

PCSK9は、分泌型セリンプロテアーゼであるNARC-1をコードしており、肝細胞表面におけるLDL受容体（LDLR）の量を制御することでコレステロール恒常性を転写後レベルで調節する主要因子である。PCSK9はLDLRの内在化とリソソーム分解を促進し、受容体のリサイクリングを調節してリポタンパク質の取り込みに影響を与えるとともに、SREBPによって駆動される脂質代謝プログラムとも統合されている。PCSK9の発現および活性は、ERからゴルジ体への輸送、分泌経路でのプロセシング、ならびに細胞外での受容体—リガンド動態と交差する。PCSK9シグナルの異常は、血漿LDLコレステロールの変動や心代謝疾患への感受性変化と強く関連しており、脂質制御の作用機序研究において広く用いられる標的となっている。

NARC-1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PCSK9の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

NARC-1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PCSK9 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPCSK9転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性NARC-1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPCSK9遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNARC-1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPCSK9発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNARC-1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。