Nap-22 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406361

Panoramica

BASP1 (Nap-22) è una proteina miristoilata associata alla membrana, arricchita nei neuroni e in altre cellule eccitabili, dove contribuisce all’organizzazione dell’actina corticale, alla dinamica di membrana e alla segnalazione dipendente dai fosfoinositidi. Modula programmi trascrizionali attraverso interazioni con fattori nucleari come WT1 e partecipa a processi quali la crescita dei neuriti, la funzione sinaptica e la differenziazione cellulare. L’attività di BASP1 è stata collegata a vie che regolano il rimodellamento del citoscheletro, la trasduzione del segnale a livello della membrana plasmatica e il controllo epigenetico dell’espressione genica. Alterazioni dell’espressione o della regolazione di BASP1 sono state riportate in molteplici contesti patologici, inclusi fenotipi di neurosviluppo e cambiamenti associati al cancro nei programmi di proliferazione e invasione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Nap-22 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene BASP1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del BASP1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto BASP1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Nap-22.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di BASP1 per lo studio della segnalazione di Nap-22, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni BASP1 critici per la funzione di Nap-22
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di BASP1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Nap-22 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Nap-22 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus BASP1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Nap-22 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Nap-22 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia BASP1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio BASP1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.