NALP1A Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-431476

Panoramica

Il gene murino Nlrp1a codifica NALP1A, un recettore citosolico di tipo NOD (NOD-like receptor) che funge da sensore dell’inflammasoma, collegando il rilevamento dello stress cellulare alla segnalazione dell’immunità innata. Dopo l’attivazione, NALP1A promuove l’assemblaggio di complessi dell’inflammasoma che inducono l’attivazione della caspasi-1 e la conseguente maturazione di citochine pro-infiammatorie come IL-1β e IL-18, mettendo in relazione il riconoscimento del pericolo con programmi di morte cellulare piroptotica. Questa via interagisce con il priming mediato da NF-κB, con le risposte allo stress mitocondriale e con reti più ampie di recettori di riconoscimento dei pattern che regolano l’infiammazione tissutale. Una segnalazione dell’inflammasoma deregolata è implicata in fenotipi infiammatori e autoimmuni ed è ampiamente studiata nel contesto delle interazioni ospite–patogeno e di trigger infiammatori sterili.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO NALP1A (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Nlrp1a in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Nlrp1a insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Nlrp1a a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina NALP1A.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Nlrp1a per lo studio della segnalazione di NALP1A, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Nlrp1a critici per la funzione di NALP1A
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Nlrp1a per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal NALP1A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal NALP1A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Nlrp1a. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal NALP1A Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR NALP1A (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Nlrp1a per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Nlrp1a definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.