N-type Ca CP α1B Double Nickaseプラスミド (h): sc-402397-NIC

CACNA1B は、N 型電位依存性カルシウムチャネル（CaV2.2）を構成する孔形成サブユニットである α1B をコードしており、興奮性細胞における脱分極に伴う Ca2+ 流入を仲介します。このチャネルは、膜の電気的活動をシナプス前終末での小胞融合および神経伝達物質放出に結び付け、シナプス可塑性、神経細胞の興奮性、活動依存的な遺伝子発現を制御する Ca2+ 依存性シグナル伝達ネットワークに組み込まれています。CACNA1B の機能は、G タンパク質共役受容体（GPCR）による調節や、シナプス伝達の動態を制御する下流経路による制御と密接に関連しています。遺伝的変異や CaV2.2 活性の調節異常は、侵害受容（痛み）処理の変化や神経精神症状様の表現型と関連づけられており、神経回路機能の機序研究における重要性を支持します。

N-type Ca CP α1B ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CACNA1B 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CACNA1B内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CACNA1Bの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CACNA1Bが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。