MYH1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400420-ACT

MYH1 codifica a cadeia pesada de miosina 1, uma proteína motora de músculo esquelético de contração rápida (fast-twitch) que impulsiona a contração baseada em actina por meio do ciclo de pontes cruzadas dependente de ATP dentro do sarcômero. Como componente central do filamento espesso, MYH1 contribui para a especificação do tipo de fibra muscular, a geração de força e a cinética contrátil, integrando-se a vias que regulam a miofibrilogênese, o manejo de cálcio e a adaptação metabólica à atividade. A variação nos padrões de expressão das cadeias pesadas de miosina é comumente usada para estudar a diferenciação do músculo esquelético, o remodelamento e as respostas à desnervação ou à sinalização que mimetiza o exercício. Programas gênicos sarcoméricos desregulados, incluindo mudanças na arquitetura contrátil associada ao MYH1, são relevantes para investigações de miopatias e de mecanismos mais amplos de disfunção neuromuscular.

MYH1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MYH1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MYH1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MYH1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MYH1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MYH1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MYH1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MYH1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MYH1 em células tumorais com expressão de MYH1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.