MyD88 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-417166-ACT

MYD88は、Toll様受容体（TLR）およびインターロイキン1受容体（IL-1R）シグナル伝達の中核となるアダプタータンパク質MyD88をコードしており、受容体の活性化を下流のNF-κBおよびMAPKの活性化へと結び付けます。MyD88はTIRドメインとデスドメインを介して、IRAKキナーゼやTRAF6とともにmyddosome複合体の形成を統括し、炎症関連遺伝子の発現と自然免疫細胞の活性化を促進します。MYD88シグナルの制御破綻は、異常なサイトカイン産生、慢性炎症、ならびに一部の血液悪性腫瘍における腫瘍性シグナル伝達プログラムに関与するとされ、免疫シグナル機構の研究における重要な結節点となっています。さらにMYD88は細胞生存やストレス応答経路とも接続しており、自然免疫によるセンシングと転写制御の文脈依存的なクロストーク解明に向けた研究を支えます。

MyD88 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MYD88の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MyD88 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MYD88 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMYD88転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MyD88の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMYD88遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMyD88依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMYD88発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMyD88経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。