Mxi1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403155-ACT

Il gene umano **MXI1** codifica **Mxi1**, un repressore trascrizionale di tipo **basic helix–loop–helix leucine zipper (bHLH-LZ)** che forma eterodimeri con **MAX** e antagonizza i programmi di espressione genica guidati da **MYC**. Reclutando complessi corepressori su regioni regolatorie contenenti **E-box**, Mxi1 contribuisce a limitare la proliferazione, modulare la progressione del ciclo cellulare e sostenere stati trascrizionali associati alla differenziazione. L’attività di MXI1 si interseca con la segnalazione della rete **MYC/MAX** e con meccanismi più ampi di controllo trascrizionale dipendenti dalla cromatina che plasmano la crescita cellulare e le risposte allo stress. La disregolazione dell’espressione o della funzione di MXI1 è stata collegata a un’alterata attività della via di MYC ed è spesso studiata in biologia dei tumori e in altri contesti in cui l’equilibrio trascrizionale influenza il destino cellulare.

Mxi1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MXI1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Mxi1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MXI1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MXI1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Mxi1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MXI1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Mxi1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Mxi1 nelle cellule tumorali con espressione di MXI1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.