Mucin 16/MUC16 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403050-ACT

MUC16 codifica per la mucina 16, una mucina transmembrana ad alto peso molecolare, fortemente O-glicosilata, che contribuisce al glicocalice epiteliale e alla funzione di barriera mucosale. Grazie ai suoi estesi repeat extracellulari in tandem e alla coda citoplasmatica, MUC16 modula le interazioni cellula–cellula e cellula–matrice, influenza i programmi di adesione e migrazione e può incidere sulle reti di segnalazione dei recettori e sul riconoscimento immunitario alla superficie cellulare. L’alterazione dell’espressione e della glicosilazione di MUC16 è ampiamente studiata nel contesto delle neoplasie epiteliali, dove correla con cambiamenti nell’invasività, nel potenziale metastatico e nelle interazioni con il microambiente tumorale. Per questo motivo, MUC16 è spesso utilizzata come nodo funzionale per indagare la biologia delle mucine di superficie, i glico-epitopi e la segnalazione prossimale alla membrana in modelli cellulari umani.

Mucin 16/MUC16 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MUC16 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Mucin 16/MUC16 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MUC16 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MUC16, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Mucin 16/MUC16. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MUC16 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Mucin 16/MUC16 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Mucin 16/MUC16 nelle cellule tumorali con espressione di MUC16 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.