Mts1 Plasmide Double Nickase (h): sc-401774-NIC

S100A4 codifica la proteina legante il calcio Mts1, un membro della famiglia S100 che agisce come regolatore citosolico ed extracellulare della motilità cellulare e della dinamica del citoscheletro. Mts1 interagisce con bersagli quali la miosina II non muscolare e modula processi tra cui il rimodellamento dell’actina, il turnover delle adesioni focali e programmi di tipo transizione epitelio-mesenchimale. Attraverso una segnalazione calcio-dipendente e il cross-talk con vie che governano migrazione e invasione, S100A4 è spesso studiato nel contesto della progressione tumorale, della fibrosi e dei microambienti infiammatori. Un’espressione deregolata di S100A4 è inoltre associata a cambiamenti nell’attivazione dello stroma e nel traffico delle cellule immunitarie, rendendolo un nodo utile per dissezionare le reti di segnalazione associate alla metastasi.

Mts1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus S100A4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di S100A4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di S100A4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con S100A4 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.