Morc3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404099-ACT

MORC3 umano (microrchidia family CW-type zinc finger 3) codifica un’ATPasi nucleare che funge da regolatore della trascrizione e dell’organizzazione del genoma associato alla cromatina. Morc3 partecipa al controllo epigenetico attraverso attività di rimodellamento della cromatina dipendenti dall’ATP e interazioni proteina–proteina che influenzano la dinamica dell’eterocromatina e le risposte della cromatina associate al danno al DNA. È stato collegato alla regolazione di programmi di espressione genica rilevanti per le risposte allo stress cellulare e per l’architettura nucleare, processi frequentemente alterati nel cancro e in fenotipi correlati al sistema immunitario. Un’attività di MORC3 alterata è quindi di interesse per studi meccanicistici che collegano lo stato della cromatina, il controllo trascrizionale e le reti di regolazione genica associate alla malattia.

Morc3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MORC3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Morc3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MORC3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MORC3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Morc3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MORC3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Morc3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Morc3 nelle cellule tumorali con espressione di MORC3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.