MOK Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-410973-ACT

A MOK humana (quinase sobreposta MAPK/MAK/MRK) codifica uma proteína quinase de serina/treonina da família CMGC relacionada às MAPK, que contribui para a regulação de programas de sinalização celular e de diferenciação. A atividade de MOK tem sido associada ao controle da expressão gênica e à organização do citoesqueleto ou de junções em epitélios especializados, sustentando papéis na homeostase tecidual e em processos de desenvolvimento. Como um nó de quinase que pode convergir com redes associadas às MAPK, alterações na expressão ou na sinalização de MOK são usadas em pesquisa para investigar a reconfiguração de vias que acompanha mudanças em proliferação, polaridade e respostas ao estresse. Padrões de expressão de quinases desregulados, incluindo MOK, são estudados por associações com contextos de sinalização oncogênica e outros distúrbios em que a diferenciação epitelial e o equilíbrio de sinalização estão comprometidos.

MOK O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MOK sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MOK O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MOK em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MOK, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MOK. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MOK nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MOK no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MOK em células tumorais com expressão de MOK silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.