MMD Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-426581

Panoramica

Mmd codifica MMD, una proteina di membrana multipasso arricchita nel Golgi e nel sistema endomembranoso, che è stata collegata alla maturazione della linea mieloide e alla biologia delle cellule dell’immunità innata. Diversi studi implicano MMD nella regolazione del traffico di membrana e delle risposte di segnalazione che modellano le risposte infiammatorie, con collegamenti alle vie MAPK/ERK e a percorsi associati alle citochine in macrofagi e tipi cellulari correlati. Un’espressione alterata di MMD è stata riportata in vari contesti immunitari e tumorali, supportandone l’utilizzo come nodo meccanicistico per indagare come i programmi mieloidi si interfaccino con lo stress cellulare e con segnali provenienti dal microambiente. Nei modelli murini, la perturbazione di MMD offre uno strumento per analizzare la segnalazione specifica di linea e i fenotipi infiammatori a livello d’organo, senza trarre inferenze terapeutiche o cliniche.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MMD (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Mmd in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Mmd insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Mmd a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MMD.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Mmd per lo studio della segnalazione di MMD, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Mmd critici per la funzione di MMD
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Mmd per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MMD CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal MMD CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Mmd. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MMD Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR MMD (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Mmd per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Mmd definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.