MLF1IP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-413208

Panoramica

CENPU codifica la proteina del centromero U (MLF1IP), un componente centrale del complesso CENP-O/P/Q/U, necessario per il corretto assemblaggio del cinetocore e per un attacco stabile dei microtubuli durante la mitosi. MLF1IP favorisce una corretta congressione e segregazione dei cromosomi, contribuendo a mantenere la stabilità genomica tramite una progressione ordinata del ciclo cellulare e processi associati al checkpoint del fuso mitotico. L’alterazione o la disregolazione dei fattori del centromero/cinetocore può causare errori di segregazione cromosomica e aneuploidia, collegando la funzione di CENPU a meccanismi comunemente associati a fenotipi di malattie proliferative. In quanto regolatore mitotico, CENPU è spesso studiato nel contesto del controllo della divisione cellulare, delle vie di instabilità cromosomica e del rimodellamento del ciclo cellulare correlato al cancro.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MLF1IP (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CENPU in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CENPU insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CENPU a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MLF1IP.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CENPU per lo studio della segnalazione di MLF1IP, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CENPU critici per la funzione di MLF1IP
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CENPU per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MLF1IP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal MLF1IP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CENPU. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MLF1IP Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR MLF1IP (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CENPU per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CENPU definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.