MKP-2 Plasmide Double Nickase (h): sc-401479-NIC

La fosfatasi proteica a doppia specificità 4 (DUSP4), nota anche come fosfatasi della MAP chinasi-2 (MKP-2), è una fosfatasi nucleare che defosforila e inattiva le MAPK, con una forte attività verso ERK1/2 e una regolazione dipendente dal contesto della segnalazione di JNK e p38. Modulando la dinamica di fosforilazione delle MAPK, MKP-2 contribuisce al controllo dei programmi genici a risposta immediata, della progressione del ciclo cellulare, della differenziazione e della trascrizione responsiva allo stress. DUSP4 partecipa alla regolazione a feedback a valle dei recettori tirosin-chinasici e di stimoli infiammatori, modellando ampiezza e durata dell’output della via delle MAPK. Alterazioni dell’espressione o dell’attività di DUSP4 sono state associate a una deregolazione della segnalazione MAPK osservata in molteplici contesti patologici, supportandone l’impiego come nodo meccanicistico per la mappatura di vie e fenotipi nelle cellule umane.

MKP-2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DUSP4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DUSP4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DUSP4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DUSP4 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.