Mitochondrial Topo I Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-408700

Panoramica

TOP1MT codifica la topoisomerasi I del DNA mitocondriale, una topoisomerasi di tipo IB che risolve lo stress torsionale generato durante la replicazione e la trascrizione del mtDNA introducendo rotture transitorie a singolo filamento e richiudendole. Mantenendo la topologia del genoma mitocondriale, TOP1MT supporta l’espressione genica mitocondriale, l’organizzazione dei nucleoidi e la capacità di fosforilazione ossidativa. L’alterazione della funzione di TOP1MT è stata associata a un’integrità del mtDNA compromessa, a prestazioni ridotte della catena respiratoria e a una maggiore sensibilità allo stress mitocondriale. Questi processi sono rilevanti per studi sulla disfunzione mitocondriale nella neurodegenerazione, nelle malattie cardiometaboliche e nella bioenergetica delle cellule tumorali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Mitochondrial Topo I (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TOP1MT in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TOP1MT insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TOP1MT a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Mitochondrial Topo I.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TOP1MT per lo studio della segnalazione di Mitochondrial Topo I, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TOP1MT critici per la funzione di Mitochondrial Topo I
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TOP1MT per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Mitochondrial Topo I CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Mitochondrial Topo I CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TOP1MT. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Mitochondrial Topo I Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Mitochondrial Topo I (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TOP1MT per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TOP1MT definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.