MIP-3β Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403239

Panoramica

CCL19 codifica la chemochina MIP-3β (nota anche come CCL19), un ligando di CCR7 che indirizza la chemiotassi dei linfociti T naïve, dei linfociti T della memoria centrale e delle cellule dendritiche mature verso i tessuti linfoidi. Modellando il traffico leucocitario, favorisce l’homing ai linfonodi, la formazione della sinapsi immunologica e una presentazione dell’antigene coordinata all’interno della zona T. La segnalazione MIP-3β–CCR7 si interseca con vie guidate da GPCR che regolano il rimodellamento del citoscheletro, l’adesione e la polarizzazione migratoria, influenzando l’architettura e la funzione degli organi linfoidi secondari. Un’espressione o una segnalazione di CCL19 deregolate sono state associate a pattern alterati di infiltrazione immunitaria nell’infiammazione cronica, nell’autoimmunità e nei microambienti tumorali, rendendolo un bersaglio utile per studi di immunologia meccanicistica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MIP-3β (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CCL19 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CCL19 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CCL19 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MIP-3β.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CCL19 per lo studio della segnalazione di MIP-3β, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CCL19 critici per la funzione di MIP-3β
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CCL19 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MIP-3β CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal MIP-3β CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CCL19. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MIP-3β Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR MIP-3β (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CCL19 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CCL19 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.