Metallothionein 3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421733

Panoramica

Mt3 codifica la metallotioneina 3 (MT3), una proteina ricca di cisteina in grado di legare metalli, che regola la disponibilità intracellulare di zinco e rame e contribuisce alla difesa cellulare contro lo stress ossidativo ed elettrofilo. Tamponando i metalli redox-attivi e modulando la segnalazione dipendente dallo zinco, MT3 può influenzare vie collegate all’omeostasi delle specie reattive dell’ossigeno, alla proteostasi e alla funzione mitocondriale. Nei tessuti murini, l’espressione di MT3 è particolarmente rilevante nel sistema nervoso, dove è stata studiata in relazione alla differenziazione neuronale, alla funzione sinaptica e alla neurotossicità associata ai metalli. Alterazioni nella gestione dei metalli e nei meccanismi di stress ossidativo che coinvolgono MT3 sono pertinenti in modelli di neurodegenerazione e di danno tissutale associato all’infiammazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Metallothionein 3 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Mt3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Mt3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Mt3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Metallothionein 3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Mt3 per lo studio della segnalazione di Metallothionein 3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Mt3 critici per la funzione di Metallothionein 3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Mt3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Metallothionein 3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Metallothionein 3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Mt3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Metallothionein 3 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Metallothionein 3 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Mt3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Mt3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.