MEK kinase-3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404290-ACT

O gene humano MAP3K3 codifica a MEK quinase-3 (MAP3K3), uma MAP quinase quinase quinase (MAP3K) de serina/treonina que integra sinais a montante provenientes de recetores de citocinas, recetores do tipo Toll e stress celular para propagar a sinalização através de cascatas de MAPK. A MAP3K3 contribui para a regulação de programas de transcrição mediados por NF-κB e por MAPK, afetando a inflamação, a sobrevivência celular, a diferenciação e a dinâmica do citoesqueleto. Através destas redes, a MAP3K3 influencia respostas de células endoteliais e imunitárias, incluindo vias associadas à sinalização angiogénica e à ativação da imunidade inata. A atividade desregulada da MAP3K3 e alterações no “wiring” das vias têm sido associadas a estados inflamatórios e a contextos de sinalização oncogénica, sustentando a sua utilidade como um nó para estudos mecanísticos de vias.

MEK kinase-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MAP3K3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MEK kinase-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MAP3K3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MAP3K3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MEK kinase-3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MAP3K3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MEK kinase-3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MEK kinase-3 em células tumorais com expressão de MAP3K3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.