Med15 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-405129-ACT

Il gene umano **MED15** codifica Med15, una subunità centrale del complesso coattivatore della trascrizione **Mediator**, che mette in comunicazione i fattori di trascrizione specifici per sequenza con la **RNA polimerasi II** per regolare i programmi di espressione genica. Med15 supporta la trascrizione responsiva agli stimoli e integra input di segnalazione che modulano lo stato della cromatina e la comunicazione tra promotori ed enhancer, influenzando processi quali il controllo del ciclo cellulare, le risposte allo stress e la differenziazione. Un’attività alterata di **MED15** è stata associata alla riprogrammazione trascrizionale osservata in diversi contesti patologici, incluse vie rilevanti per il cancro che dipendono dalla trascrizione mediata da Mediator. Di conseguenza, **MED15** viene spesso studiato per il suo ruolo nella regolazione di reti geniche specifiche di via e della plasticità trascrizionale in modelli cellulari umani.

Med15 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MED15 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Med15 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MED15 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MED15, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Med15. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MED15 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Med15 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Med15 nelle cellule tumorali con espressione di MED15 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.