Med15 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405129-ACT

O gene humano **MED15** codifica a proteína Med15, uma subunidade central do complexo coativador de transcrição **Mediator**, que conecta fatores de transcrição específicos de sequência à RNA polimerase II para regular programas de expressão gênica. A Med15 sustenta a transcrição responsiva a estímulos e integra sinais que modulam o estado da cromatina e a comunicação entre promotores e enhancers, influenciando processos como controle do ciclo celular, respostas ao estresse e diferenciação. Alterações na atividade de **MED15** têm sido associadas à reprogramação transcricional observada em diversos contextos de doença, incluindo vias relevantes para o câncer que dependem de transcrição mediada pelo Mediator. Por isso, **MED15** é frequentemente estudado por seu papel na regulação de redes gênicas específicas de vias e na plasticidade transcricional em modelos de células humanas.

Med15 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MED15 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Med15 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MED15 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MED15, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Med15. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MED15 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Med15 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Med15 em células tumorais com expressão de MED15 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.