Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
MDM2 Plasmide Double Nickase (m): sc-421611-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MDM2 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il MDM2 Double Nickase Plasmid (m) e il MDM2 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Mdm2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: MDM2 Antibody (SMP14): sc-965
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MDM2 Plasmide Double Nickase (m) | sc-421611-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MDM2 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-421611-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino **Mdm2** codifica la ligasi E3 dell’ubiquitina **MDM2**, un regolatore negativo centrale di **TP53** che controlla la stabilità di p53, la sua localizzazione nucleare e l’output trascrizionale. Promuovendo l’ubiquitinazione di p53 e la sua degradazione proteasomiale, MDM2 modula le risposte al danno al DNA, i checkpoint del ciclo cellulare, l’apoptosi e la senescenza all’interno di reti di segnalazione dello stress che includono le vie **ATM/ATR–CHK**. MDM2 interagisce inoltre con la segnalazione dello stress ribosomiale e con la regolazione a feedback dell’asse p53, influenzando gli esiti cellulari sotto stress oncogenico o genotossico. Un’espressione o attività deregolata di **Mdm2** è spesso associata a un’aberrante soppressione della via di p53 ed è ampiamente studiata in modelli di tumorigenesi, integrità del genoma e omeostasi dello sviluppo.
MDM2 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Mdm2 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Mdm2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Mdm2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Mdm2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.