MDC Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422840

Panoramica

Ccl22 codifica la chemochina “macrophage-derived chemokine” (MDC), un ligando di CCR4 che promuove la migrazione direzionata delle cellule immunitarie, in particolare dei linfociti T CD4+ polarizzati Th2, dei linfociti T regolatori e di altri leucociti che esprimono CCR4. MDC è prodotta da macrofagi, cellule dendritiche e altre popolazioni stromali/immunitarie in risposta a segnali infiammatori, plasmando il traffico dei leucociti, le risposte guidate dall’antigene e la composizione immunitaria dei tessuti. Attraverso la segnalazione mediata dal recettore delle chemochine, che attiva vie dipendenti da GPCR come PI3K–AKT e MAPK e modula la dinamica del citoscheletro, Ccl22 contribuisce all’omeostasi immunitaria e ai microambienti infiammatori locali. Una segnalazione Ccl22/MDC deregolata è stata associata, in modelli murini, a pattern alterati di reclutamento dei linfociti T, rilevanti per l’infiammazione allergica, l’autoimmunità e le interazioni tra tumore e sistema immunitario.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MDC (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ccl22 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ccl22 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ccl22 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MDC.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ccl22 per lo studio della segnalazione di MDC, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ccl22 critici per la funzione di MDC
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ccl22 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MDC CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal MDC CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ccl22. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MDC Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR MDC (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ccl22 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ccl22 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.