MBOAT1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406397

Panoramica

MBOAT1 (membrane bound O-acyltransferase domain containing 1) codifica un’aciltransferasi associata al reticolo endoplasmatico, implicata nel rimodellamento dei lipidi tramite il trasferimento di gruppi acilici di acidi grassi a substrati idrossilati, influenzando la composizione dei lipidi di membrana e l’omeostasi lipidica cellulare. Modulando l’equilibrio dei lipidi bioattivi e le proprietà della membrana, MBOAT1 può incidere su processi di segnalazione collegati alla regolazione metabolica, alla funzione degli organelli e alle risposte allo stress cellulare. L’alterazione dell’attività delle aciltransferasi di membrana è stata esplorata in contesti quali dislipidemia, segnalazione infiammatoria e biologia tumorale, in cui cambiamenti nella composizione lipidica possono rimodellare le vie di proliferazione e sopravvivenza. Di conseguenza, MBOAT1 rappresenta un bersaglio utile per analizzare i meccanismi guidati dai lipidi che collegano il rimodellamento della membrana ai fenotipi cellulari a valle.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MBOAT1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MBOAT1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MBOAT1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MBOAT1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MBOAT1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MBOAT1 per lo studio della segnalazione di MBOAT1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MBOAT1 critici per la funzione di MBOAT1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MBOAT1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MBOAT1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal MBOAT1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MBOAT1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MBOAT1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR MBOAT1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MBOAT1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MBOAT1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.