Max Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400596-ACT

Il gene umano **MAX** codifica Max, un fattore di trascrizione di tipo basic helix–loop–helix leucine zipper che dimerizza con **MYC**, **MXD/MNT** e partner correlati per legarsi agli elementi E-box del DNA e regolare programmi di espressione genica che controllano la progressione del ciclo cellulare, il metabolismo, la differenziazione e l’apoptosi. Attraverso le dinamiche della rete **MYC–MAX** e **MXD–MAX**, Max contribuisce a bilanciare l’attivazione trascrizionale rispetto alla repressione in processi quali la biogenesi dei ribosomi, la funzione mitocondriale e le vie di segnalazione della crescita. Alterazioni di **MAX** possono rimodellare i circuiti trascrizionali oncogeni e sono state implicate in cambiamenti associati ai tumori nell’espressione genica guidata da MYC. In quanto cofattore nodale nella regolazione trascrizionale associata alla cromatina, **MAX** è spesso studiato in contesti di segnalazione proliferativa e di controllo trascrizionale specifico di linea cellulare.

Max Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MAX senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Max Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MAX nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MAX, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Max. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MAX nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Max nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Max nelle cellule tumorali con espressione di MAX silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.