Maspin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-416693-ACT

ヒトSERPINB5は、阻害活性を持たないserpinファミリー分子であるマスピン（maspin）をコードしており、上皮細胞の接着、運動性、および細胞外マトリックスとの相互作用の調節に関与するとされています。マスピンは、プラスミノーゲン活性化の制御、細胞‐マトリックス間シグナル伝達、ならびに細胞骨格ダイナミクスの調節と関連づけられており、浸潤、遊走、組織リモデリングなどの過程に影響を及ぼします。腫瘍では、マスピンの発現量や細胞内局在が腫瘍種を問わずしばしば変化しており、腫瘍進展や転移関連形質を文脈依存的に制御する因子として研究されています。そのため、SERPINB5は、上皮分化、ストレス応答、微小環境からのシグナルを結び付ける経路をがん生物学の観点から解析するうえで広く用いられています。

Maspin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SERPINB5の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Maspin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SERPINB5 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSERPINB5転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Maspinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSERPINB5遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMaspin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSERPINB5発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMaspin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。