MAPK15 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-406816-ACT

MAPK15 (nota anche come ERK7/ERK8) è una chinasi proteica atipica attivata da mitogeni (MAPK) che regola la segnalazione chinasi legata alle risposte cellulari allo stress, al controllo della proliferazione e al traffico intracellulare. È stata implicata nella modulazione dell’autofagia e dei processi correlati alla ciliogenesi, integrando segnali che influenzano la progressione del ciclo cellulare e la proteostasi. L’attività di MAPK15 interseca le reti di segnalazione MAPK e può modulare, in modo dipendente dalla fosforilazione, il controllo dei programmi trascrizionali e dell’organizzazione del citoscheletro. Un’espressione o una segnalazione deregolata di MAPK15 è stata associata a fenotipi di crescita alterati ed è oggetto di studio nel contesto della biologia del cancro e di altri disturbi che coinvolgono un’omeostasi della segnalazione compromessa.

MAPK15 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MAPK15 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MAPK15 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MAPK15 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MAPK15, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MAPK15. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MAPK15 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MAPK15 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MAPK15 nelle cellule tumorali con espressione di MAPK15 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.