Plásmido CRISPR de Activación (h) MAPK15: sc-406816-ACT

MAPK15 (también conocida como ERK7/ERK8) es una quinasa de proteínas activada por mitógenos (MAPK) atípica que regula la señalización de quinasas vinculada a las respuestas al estrés celular, el control de la proliferación y el tráfico intracelular. Se ha implicado en la modulación de la autofagia y de procesos relacionados con la ciliogénesis, integrando señales que influyen en la progresión del ciclo celular y la proteostasis. La actividad de MAPK15 se interseca con las redes de señalización MAPK y puede moldear el control, dependiente de la fosforilación, de programas transcripcionales y de la organización del citoesqueleto. La expresión o la señalización desreguladas de MAPK15 se han asociado con fenotipos de crecimiento alterados y se investigan en el contexto de la biología del cáncer y otros trastornos que implican una homeostasis de señalización perturbada.

MAPK15 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MAPK15 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MAPK15 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MAPK15 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MAPK15, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MAPK15. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MAPK15 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MAPK15 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MAPK15 en células tumorales con expresión de MAPK15 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.