MagT1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404484-ACT

MAGT1 codifica a MagT1, uma proteína de membrana multipasse do retículo endoplasmático que atua como transportador de magnésio e como componente do complexo oligosacariltransferase (OST) envolvido na glicosilação N-ligada. Por meio de suas funções na homeostase iônica e na glicosilação de proteínas, a MagT1 influencia o controle de qualidade do dobramento proteico, a integridade da via secretora e processos de sinalização que dependem de receptores adequadamente glicosilados. A deficiência de MAGT1 está ligada a fenótipos de imunodeficiência e tem sido associada a alterações na ativação de linfócitos e à suscetibilidade a infecções virais, destacando sua relevância para a sinalização imune e as interações entre hospedeiro e patógeno. A atividade desregulada de MAGT1 também é estudada no contexto de respostas ao estresse celular e de vias dependentes de glicoproteínas que afetam amplos aspectos da fisiologia celular.

MagT1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MAGT1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MagT1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MAGT1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MAGT1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MagT1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MAGT1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MagT1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MagT1 em células tumorais com expressão de MAGT1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.