MAGE-A3 Double Nickaseプラスミド (h): sc-402571-NIC

MAGEA3はMAGE-A3（がん精巣抗原）をコードしており、通常は生殖細胞に限局して発現しますが、多様な腫瘍タイプでしばしば再発現し、増殖やストレス耐性に関連する細胞状態プログラムに影響を及ぼし得ます。MAGE-A3は、ユビキチン–プロテアソーム系に関連する過程に関与し、アポトーシス、免疫認識、転写制御を形作るシグナル伝達の要所を調節することで、タンパク質恒常性（プロテオスタシス）に関与します。MAGEA3の異常発現は悪性進展や腫瘍免疫生物学と関連しており、抗原発現制御やがん性リワイヤリングの解明に有用な分子学的手がかりとなります。細胞モデルでは、MAGE-A3は、がん精巣遺伝子のエピジェネティック制御や、タンパク質毒性および代謝ストレス下での生存を司る経路に関する文脈で研究されることが一般的です。

MAGE-A3 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における MAGEA3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、MAGEA3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、MAGEA3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、MAGEA3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。