MAGE-A1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401056-ACT

Il gene umano **MAGEA1** codifica **MAGE-A1**, un antigene cancro/testicolo appartenente alla famiglia degli antigeni associati al melanoma (MAGE), la cui espressione è normalmente limitata alle cellule germinali ma può essere riattivata in modo aberrante in molteplici contesti tumorali. MAGE-A1 partecipa all’omeostasi proteica e alla regolazione trascrizionale attraverso interazioni con ligasi E3 dell’ubiquitina e altri partner regolatori, influenzando il turnover dipendente dall’ubiquitina e i programmi di segnalazione a valle. La sua espressione deregolata è associata ad alterazioni della presentazione dell’antigene e delle caratteristiche di riconoscimento immunitario delle cellule maligne ed è ampiamente utilizzata come marcatore molecolare dell’espressione genica associata ai tumori. Lo studio di MAGE-A1 supporta indagini meccanicistiche sulla de-repressione epigenetica, sui circuiti di risposta allo stress e sul contributo della via ubiquitina–proteasoma a fenotipi rilevanti per la malattia.

MAGE-A1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MAGEA1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MAGE-A1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MAGEA1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MAGEA1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MAGE-A1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MAGEA1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MAGE-A1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MAGE-A1 nelle cellule tumorali con espressione di MAGEA1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.