Particules Lentivirales d'Activation (h) MACF1: sc-402923-LAC

Le facteur de liaison croisée microtubules–actine 1 (MACF1) est une grande protéine d’échafaudage du cytosquelette de type spectraplakine, qui coordonne les interactions entre les microtubules et la F‑actine afin de réguler la polarité cellulaire, la migration et l’organisation intracellulaire. Dans les cellules humaines, MACF1 soutient des processus tels que le renouvellement des adhésions focales, le positionnement des vésicules et des organites, ainsi que le remodelage du cytosquelette, qui sous-tendent la morphogenèse épithéliale et la croissance neuritique. Elle a également été associée à l’intégration des signaux au niveau du cortex cellulaire, notamment via des rôles dans la dynamique de la voie Wnt/β‑caténine et dans un trafic dépendant du cytosquelette. La dérégulation du contrôle cytosquelettique associé à MACF1 a été étudiée dans des contextes incluant des phénotypes neurodéveloppementaux, l’intégrité des barrières et le comportement cellulaire invasif, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de l’architecture tissulaire et de la motilité cellulaire.

Les particules d'activation lentivirales MACF1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de MACF1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales MACF1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription MACF1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de MACF1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif MACF1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.