LXR alpha/NR1H3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-423616-ACT

Nr1h3 codifica o receptor X do fígado alfa (LXRα/NR1H3), um receptor nuclear ativado por ligante que forma heterodímeros com o RXR para regular programas de transcrição que controlam o efluxo de colesterol, o metabolismo de ácidos biliares e a síntese de ácidos graxos. Em macrófagos e hepatócitos, o LXRα coordena o manejo de lipídios por meio de alvos como ABCA1/ABCG1 e interage com a sinalização imune inata para modular a expressão de genes inflamatórios. Essas vias conectam a atividade de NR1H3 à biologia de células espumosas, ao acúmulo de lipídios aterogênicos e à inflamação metabólica, tornando-o um alvo amplamente utilizado para estudar a homeostase lipídica em modelos de doenças cardiovasculares e metabólicas. Em sistemas murinos, a perturbação de Nr1h3 também é utilizada para dissecar a comunicação cruzada entre a detecção de esteróis, a lipogênese hepática e a polarização de células imunes.

LXR alpha/NR1H3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Nr1h3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LXR alpha/NR1H3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Nr1h3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Nr1h3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LXR alpha/NR1H3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Nr1h3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LXR alpha/NR1H3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LXR alpha/NR1H3 em células tumorais com expressão de Nr1h3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.