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LSRCRISPR激活质粒(h) | sc-401518-ACT | 20 µg | $397.00 |
人类 LSR(lipolysis stimulated lipoprotein receptor,脂解刺激脂蛋白受体),又称 angulin-1,是一种膜相关蛋白,参与脂质与脂蛋白的处理,并在三细胞紧密连接处促进上皮屏障的组织与维持。通过协调连接结构与膜运输,LSR 影响细胞极性、旁细胞通透性以及形成屏障的上皮组织的稳态。LSR 表达的改变与脂质代谢失衡和屏障功能障碍有关,而这些过程与炎症、代谢性疾病以及肿瘤相关的上皮完整性改变密切相关。上述功能使 LSR 成为研究脂质通路与连接信号网络之间相互串扰的一个有价值节点。
LSR CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性LSR的表达。
LSR CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的LSR基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于LSR转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性LSR表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的LSR位点,并能够研究内源性位点上依赖于LSR的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在LSR表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟LSR通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。