LSM8 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404816-ACT

A LSM8 humana codifica uma proteína de ligação a RNA do tipo Sm que é um componente central da pequena ribonucleoproteína nuclear U6 e do anel LSm2–8, sustentando a estabilidade do snRNA U6, a biogênese de snRNPs e a montagem do spliceossomo durante o splicing do pré-mRNA. Por meio dessas funções, a LSM8 contribui para a remoção correta de íntrons e para a integridade do transcriptoma, conectando-se a redes de processamento de RNA que moldam a progressão do ciclo celular e programas de expressão gênica responsivos ao estresse. A perturbação da homeostase do spliceossomo e de snRNPs está amplamente associada a isoformas aberrantes de mRNA e à desregulação da expressão gênica em múltiplos contextos de doença, tornando a LSM8 um nó útil para estudos mecanísticos de fenótipos dependentes de splicing. Seu papel essencial no metabolismo de RNA também oferece um ponto de entrada bem definido para investigar como fatores centrais de splicing influenciam o estado celular e a diversidade do proteoma.

LSM8 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LSM8 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LSM8 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LSM8 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LSM8, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LSM8. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LSM8 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LSM8 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LSM8 em células tumorais com expressão de LSM8 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.