Lsh Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-402466-LAC

HELLS umano codifica per la lymphoid-specific helicase (Lsh), un rimodellatore della cromatina ATP-dipendente della famiglia SNF2 che coopera con le DNA metiltransferasi per stabilire e mantenere i pattern di metilazione del DNA e stati di cromatina repressiva. Lsh sostiene l’organizzazione dell’eterocromatina, il silenziamento dei trasposoni e l’assemblaggio della cromatina accoppiato alla replicazione, collegando il rimodellamento dei nucleosomi guidato dall’ATP alla stabilità del genoma e all’ereditarietà epigenetica. Partecipa a vie che regolano la riparazione del DNA, la progressione del ciclo cellulare e programmi trascrizionali specifici di linea cellulare attraverso la regolazione dell’accessibilità della cromatina. Un’attività deregolata di HELLS e un’alterata espressione di Lsh sono state associate a instabilità dell’epigenoma e a programmi aberranti di silenziamento genico riportati in molteplici contesti tumorali e in disturbi dello sviluppo, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici del controllo epigenetico.

Le particelle di attivazione lentivirale Lsh (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di HELLS in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Lsh (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione HELLS, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Lsh. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo HELLS e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.