LRRC26 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-432708

Panoramica

Lrrc26 codifica LRRC26, una proteina ausiliaria contenente ripetizioni ricche in leucina che modula il gating dei canali del potassio (BK) ad alta conduttanza attivati da Ca2+ e dal voltaggio. Spostando l’attivazione dei canali BK verso potenziali di membrana più fisiologici, LRRC26 influenza l’eccitabilità di membrana, la dinamica della segnalazione del Ca2+ e i processi di trasporto ionico epiteliale. Questo ruolo regolatorio collega LRRC26 a vie che controllano il tono della muscolatura liscia, la funzione degli epiteli secretori e l’accoppiamento stimolo-secrezione. Alterazioni della regolazione dei canali BK e dell’espressione delle subunità ausiliarie sono state associate a disfunzioni fisiologiche in tessuti eccitabili ed epiteliali, a supporto dell’uso di modelli Lrrc26 per indagare meccanismi rilevanti per le canalopatie e l’omeostasi tissutale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO LRRC26 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Lrrc26 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Lrrc26 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Lrrc26 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina LRRC26.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Lrrc26 per lo studio della segnalazione di LRRC26, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Lrrc26 critici per la funzione di LRRC26
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Lrrc26 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal LRRC26 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal LRRC26 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Lrrc26. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal LRRC26 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR LRRC26 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Lrrc26 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Lrrc26 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.